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張艷凱 副主任醫(yī)師 開封市中心醫(yī)院 急診科
細(xì)胞周期一般有幾種檢測方法，如流式檢測法、BrdU(5~溴脫氧尿嘧啶核苷)摻入法及同位素標(biāo)記法等，尤其是其中的流式檢測法可適用于大量樣品的細(xì)胞周期檢測，能急速的分析單個(gè)細(xì)胞的多種特性，它是現(xiàn)在最經(jīng)常用到的測定細(xì)胞周期的一種很有效的方法，以下就其中的流式細(xì)胞儀來進(jìn)行周期分析和測試。
一、流式檢測的實(shí)驗(yàn)原理
1、由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同，因此，可通過特異性與DNA結(jié)合染料來檢測細(xì)胞內(nèi)的DNA含量來測定細(xì)胞周期。
2、流式中常用碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)與DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。
二、流式細(xì)胞儀的實(shí)驗(yàn)步驟
1、收集細(xì)胞 取適量的對數(shù)生長期細(xì)胞接種于6cm中，在相應(yīng)的條件下（如藥物）處理相應(yīng)時(shí)間后，倒去培養(yǎng)基，用胰酶適度消化細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，棄去上清。
2、清洗及固定細(xì)胞 用PBS清洗細(xì)胞2遍，吸凈離心管殘余的PBS后，加入300μL PBS重懸。
3、洗滌細(xì)胞 次日，離心收集細(xì)胞，用移液槍吸走上清，然后用1mL PBS重懸細(xì)胞并離心清洗2~3遍。
4、RNA酶消化和PI染色 在避光條件下，每個(gè)樣品加入1避光 RNase （10mg/mL）和5和mg/m（5mg/mL）混勻后室溫避光條孵育30min。
5、上機(jī)檢測 將檢測樣品轉(zhuǎn)移到5mL的流式管后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，采用flowjo或modifit軟件進(jìn)行DNA含量分析。
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